معلومة

هل ينبغي أن يتناسب طول الأقطاب الكهربائية في حجرة الرحلان الكهربائي مع حجم الغرفة؟


أحاول بناء غرفة تفريد أفقية صغيرة من الصفر. أريد استخدامه لفحص المذنب وسأستخدم شريحة واحدة فقط ، لذلك سيكون عرضه حوالي 3 سم وطوله 10 سم وارتفاعه 4 سم ، وهو ما يكفي فقط لملاءمة الشريحة وكمية صغيرة من المخزن المؤقت. بقدر ما أعرف أن هذا الشيء غير متوفر تجاريًا ، لذا قبل أن أقوم به أريد التأكد من أنه سيعمل. القضية الرئيسية هي تكلفة القطب (يجب أن يكون سلك بلاتيني). لا أريد أن أنفق هذا القدر من المال فقط لأدرك أنه لا يعمل. سؤالي هو: هو قطب 3 سم في 60-70 سم3 يكفي؟ في الأساس ، هل هناك أي قيود مادية على حجم وموضع الأقطاب الكهربائية وشكل الغرفة؟ نظرًا لأنني عالم أحياء ومعرفتي بالفيزياء محدودة للغاية ، سأكون ممتنًا للغاية لأي معلومات حول هذا الموضوع.


لا تعلق هذه التعليمات الخاصة ببناء غرفة رحلان كهربائي على الحد الأدنى لطول السلك ، ولكنها من ناحية أخرى تقترح استخدام شيء يسمى Monel Seizing Wire (سبيكة Ni / Cu - 8.95 جنيه إسترليني لمسافة 10 أمتار في المملكة المتحدة) أو قياس 20 الأسلاك النحاسية ، لذلك إذا اتبعت نصائحهم ، فربما لا داعي للقلق بشأن التكلفة.

أتخيل أن الأقطاب الكهربائية المصنوعة من السبائك لن تدوم طويلاً ، لكن استبدالها سيكون رخيصًا - في الواقع سوف تبحث عن فرص لاستخدام كل الأسلاك الزائدة!


Spurthi & # 039s AP Biology Notebook


الملخص
الرحلان الكهربائي للهلام هو طريقة تفصل الجزيئات بناءً على معدل الحركة عبر الهلام أثناء تطبيق مجال كهربائي. يعتمد الاتجاه الذي تتحرك فيه الجزيئات (للأمام أو للخلف) على شحنة الجزيئات لأنها ستتحرك باتجاه القطب المعاكس لها. تتأثر سرعة تحرك هذه الجزيئات أيضًا بالجوانب الفيزيائية للجزيء ، مثل الحجم والشكل ، وكثافة الهلام ، وقوة مجال الكهرباء. نظرًا لأن كثافة الهلام وقوة المجال الكهربائي هي نفسها بالنسبة لجميع الجزيئات في غرفة رحلان كهربي معينة ، فإن أصغر الجسيمات سيكون لها أسرع معدل للحركة.

نظرًا لأننا لم نكن قادرين على استخدام الحمض النووي لهذا المختبر ، فقد كان علينا استبدالها بتحميل الأصباغ. تحتوي صبغات التحميل هذه على سكروز وأزرق بروموفينول ومخزن TE. لقد صنعنا الجيلاتين بحيث تحتوي على فتحات صغيرة بها مسافة بادئة في النهاية البعيدة. في تلك الخدوش ، نملأها بصبغة تحميل مختلفة الألوان. غرقت صبغة التحميل إلى الأسفل لأنها تحتوي على السكروز. كان اللون الأزرق البروموفينول هو الطريقة التي تمكنوا من صبغهم من التحرك على طول إما إيجابية أو سلبية. استنادًا إلى مكان تحريك الصبغة ، يمكننا تحديد حجم الجزيئات الموجودة فيه وما إذا كانت موجبة أم سلبية.

الجزء الأول
أولاً قمنا بصب مادة هلامية باستخدام حمام مائي وميكروويف ومشط جل 6 آبار وصنبور اخفاء وصينية وهلام الاغاروز. باستخدام شريط التقنيع ، قمنا بتغطية طرفي صينية الصب الهلامية لمنع تساقط هلام الاغاروز. بعد ذلك نترك الجل يذوب في حمام الماء الذي فشل في تسخينه لفترة كافية. لذلك قمنا بتسخين زجاجة الهلام في الميكروويف مع إزالة الغطاء كل دقيقة واحدة حتى تذوب تمامًا. باستخدام القفازات الواقية ، أخرجنا الزجاجة ، وقمنا بقياس 15 مل من السائل في أنبوب اختبار واستخدمنا 15 مل في صينية الصب. ومع ذلك ، قبل أن نسكب الجل على الدرج مباشرة ، نضع مشط الهلام المكون من 6 آبار بالقرب من نهاية الدرج. بعد السماح للجيل بالتماسك على الدرج ، قم بإزالة صنبور التقنيع من جانب واحد. قبل تحريك الجل بعناية دون اقتحام الحجرة ، صب العازل من دورق في جانب واحد من الغرفة. بعد وضع الجل على الغرفة ، أضف المخزن المؤقت حتى يصبح المستوى حوالي 2-3 مم فوق الجزء العلوي من الجل. أغلق الغرفة واسمح لها بالبقاء في هذا الوضع لمدة 24-48 ساعة.
الجزء 2
بعد يومين ، انقل الجل من الحجرة مرة أخرى إلى اللوحة حتى يتناسب تمامًا. بعد ذلك ، ضع اللوح مع الجل مرة أخرى في الحجرة وصب المخزن المؤقت في الحجرة بحيث يكون حوالي 2-3 ملليمترات فوق الهلام. باستخدام الماصة الدقيقة ، خذ لونًا من الصبغة واحصل على 10 مايكرولتر منه. كرر هذه الخطوة 4 مرات أخرى بألوان مختلفة من الأصباغ وباستخدام الماصات الدقيقة المختلفة لكل لون. بعد ذلك ، قم بتوصيل 5 بطاريات قلوية في كومة وقم بتوصيل السلك الأحمر والسلك الأسود من البطاريات إلى الأجزاء الخاصة بها من الغرفة. بمجرد توصيل حزمة البطارية بالحجرة ، راقب ظهور الفقاعات وما إذا كانت الأصباغ الملونة المختلفة تتحرك وإذا كان الأمر كذلك في أي اتجاه من الغرفة. بعد الملاحظة ، افصل حزمة البطارية عندما تكون عينة الصبغة الأسرع تتحرك بالقرب من نهاية الجل.


تم أخذ هذا في غضون دقائق من تفعيل المجال الكهربائي. كما ترى ، فإن معظم الأصباغ لها معدلات حركة بطيئة.

التقطت هذه الصورة قبل فصل الأسلاك وإيقاف تدفق الكهرباء. النتائج ، التي تم التحقق منها بواسطة هذه الصورة ، مسجلة أدناه.

يتم تحديد طول واتجاه المدى من خلال شحنة الجزيء. بناءً على النتائج ، يمكننا بعد ذلك أن نستنتج أن صبغة الكريستال البنفسجي هي الأكثر سلبية. إنه أيضًا الجزيء الوحيد ذو الشحنة السالبة في مختبرنا. كان ميثيل جرين الأكثر إيجابية ، يليه خليط الصبغة ، زيلين سيانول ، وأخيراً بروموفينول بلو.

لم تكن الصبغة الكريستالية البنفسجية في خليط الصبغة لأنه لم يكن هناك شريط صبغ موجود في الممر 6.

تهاجر بعض الأصباغ نحو القطب الموجب والبعض الآخر نحو القطب السالب لأنه في المجال الكهربائي ، تميل الجزيئات نحو شحنة معاكسة للشحنة التي تحملها. لذلك تميل الجزيئات الموجبة نحو السلبية والعكس صحيح.

ستؤدي زيادة تركيز الاغاروز في مادة هلامية إلى تقليل حجم مسام الجل بمجرد تصلب الجل. يمكن استخدام حجم المسام الأصغر لفصل خليط من الجزيئات الأصغر.

عندما حدث فصل الأصباغ بنسبة أعلى من هلام الاغاروز من تلك المستخدمة لفصل العديد من مخاليط الحمض النووي. يمكننا أن نفترض أن جزيئات الصبغة بشكل عام أصغر من شظايا الحمض النووي.

إذا تم استدعاؤنا بعيدًا عن مختبرنا الكهربائي ولم نتمكن من مراقبة مختبرنا ، فبمرور الوقت ، ستستمر عينات الصبغة في التحرك نحو الجانب السلبي أو الإيجابي من القطبين. إذا تركناها لفترة كافية ، فإن الجل سينتقل من الجل.

يختلف إجراء الرحلان الكهربائي للحمض النووي عن طريق الاغاروز عن الإجراء الخاص بنا لأن الحمض النووي غير مرئي للعين لذلك يتطلب صبغة تتبع على عينات الحمض النووي لتحديد موعد إنهاء معمل الفصل الكهربائي. الفرق الآخر هو أن الحمض النووي يحمل شحنة سالبة لذلك توضع العينات في أحد طرفي الهلام بدلاً من الطرف الآخر.

الكهربائي مقابل. اللوني

إعداد الكهربائي


استخدام آخر للرحلان الكهربائي يمكن أن يكون الهندسة الوراثية ، وتحديد البروتينات ، واختبار الأبوة ، والكشف عن الاضطرابات الوراثية. يمكن استخدام أي شيء يتعلق بالحمض النووي في الرحلان الكهربائي.

هل ينبغي إنشاء بنوك بيانات لمعلومات الحمض النووي؟ يجب إنشاء بنوك بيانات لمعلومات الحمض النووي طالما أنها تساعد الآخرين ولا يتم إساءة استخدامها. من فوائده استخدامه لدراسة الاضطرابات الجينية أو تحديد الهوية في قضايا المحاكم ، لكن العيب هو البحث لمحاولة تغيير الحمض النووي من أجل المظهر. يجب أن يكون الأشخاص الذين يجب أن يتحكموا في المعلومات هم الشخص الذي يتم تخزين الحمض النووي الخاص به ويجب أن يتحكم الأشخاص الجديرون بالثقة في المعلومات. على سبيل المثال ، الشخص الجيد للوظيفة هو الشخص الذي لن يستخدم بنك الحمض النووي لمنافعه. يجب أيضًا أن تكون تحت حراسة مشددة لأنها معلومات شخصية. يجب استخدام الحمض النووي المأخوذ من المشتبه به لتحديد هويته بدقة لتحديد الهوية والتعرف فقط. فقط الأطفال الذين لديهم تاريخ عائلي للإصابة باضطراب وراثي يجب أن يتم أخذ بصمات الحمض النووي الخاصة بهم عند الولادة لأغراض السلامة ولأغراض الوقاية المبكرة.

استنتاج
بعد إجراء هذه التجربة باستخدام صبغات التحميل ، توصلنا إلى أن صبغة الكريستال البنفسجي كانت الأكثر سلبية. خلصنا أيضًا إلى أن الميثيل الأخضر كان الأكثر إيجابية. ساعدتنا هذه التجربة على اكتساب فهم أفضل للهلام الكهربائي.


الخطوة 1: الأجزاء والأدوات

مواد الاكريليك وملفات التصميم

من أي مورد لمواد الأكريليك (McMaster-Carr ، US Plastics ، إلخ):

12 × 12 × 1/4 بوصة من الأكريليك الشفاف
12 × 12 × 1/4 بوصة أكريليك أزرق (أو لون مفضل)
5 × 5 × 1/8 بوصة أكريليك شفاف

لوح تفلون 6 × 6 × 1/16 بوصة ، Cat # 8545K13

1/8 "سولاكريل (الأشعة فوق البنفسجية المنقولة) - اختياري : إذا كنت لا تحتاج إلى علبة جل قابلة للأشعة فوق البنفسجية ، فقم ببساطة بصنع هذه الأجزاء من الأكريليك الشفاف العادي.

باستخدام ملفات التصميم المرفقة أدناه ، قم بقص الأجزاء من المادة الخاصة بك - يتم تحديد نوع المادة المراد استخدامها في عنوان الملف. إذا لم يكن لديك وصول إلى قاطع الليزر ، فيمكنك إرسال الملفات إلى أي خدمة قطع بالليزر (نستخدم Pololu). ستحمل هذه الخدمات أيضًا معظم المواد التي تحتاجها باستثناء solacryl. يمكنك أيضًا شراء مجموعة من متجرنا عبر الإنترنت (IO Rodeo ، Cat # IMG-01) مقابل 93 دولارًا. تحتوي المجموعة على جميع أجزاء وقطع الليزر ، وأسلاك بلاتينية (بدلاً من أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ) وأمشاط مُجمَّعة مسبقًا. ستظل بحاجة إلى شراء Weld-On.

الأجهزة والأدوات

2-56 فتحة صنبور يدوية ، Cat # 2522A663
صنبور مفتاح ربط منزلق على شكل T ، 0-1 / 4 بوصة (1.6-6.3 مم) حجم الحنفية ، Cat # 2546A22
2x 2-56 نايلون عموم رأس مشقوق برغي آلة ، 3/16 "الطول ، Cat # 93135A076
4 × 2-56 برغي آلة برأس مشقوق من النايلون ، طول 1/8 بوصة ، Cat # 93135A074
سلك فولاذي مقاوم للصدأ ، قطره 0.01 بوصة. Cat # 9882K31
2x 6/32 صواميل آلة سداسية Cat # 91841A007
2x غسالة مسطحة ، رقم 6 حجم المسمار ، 5/16 "Cat # 92141A008

IPS ملحومة على الأسمنت رقم 3 أو 4 ، Cat # 10792
آلة رش مادة التلحيم Solvent cement ذات النوع المنخفض ، Cat # 25658

2x قابس الموز ، Cat # 655K-ND
كابل توصيل الموز الأسود ، 36 بوصة ، Cat # 4771-36-0-ND
كابل توصيل الموز الأحمر ، 36 بوصة ، Cat # 4771-36-2-ND
4x أقدام مطاطية ، Cat # SJ5012-0-ND

المرفقات


النتائج

الإجراء الموصى به

صندوق الهلام مصنوع من حاوية تخزين بلاستيكية (14 × 20 × 5 سم ، 1.6 لتر) ومزودة بأقطاب من رقائق الألومنيوم (شرائط مطوية بأربع طبقات 1 × 25 سم) بمسافة 14 سم ، متصلة بشريط لاصق أو غراء. يتم توصيل الأقطاب الكهربائية بخمس بطاريات 9 فولت في سلسلة باستخدام أسلاك مزودة بمشابك التمساح. تم صب المواد الهلامية في طبق خبز زجاجي نظيف (9 × 13 بوصة) ، حيث تم رسم مستطيل (8.5 × 5.5 سم) بقلم شمع. تم صهر أجار العلامة التجارية للهاتف (1 جم) باستخدام فرن ميكروويف في 50 مل من المخزن المؤقت (3 جم لتر −1 Seachem Neutral pH Regulator). بعد صب الآجار المصهور بعناية في مستطيل قلم التلوين حتى يمتلئ ، تم استخدام مشط مصنوع من بطاقة هدايا متجر بلاستيك ومشابك ربط لتشكيل آبار على بعد حوالي 1 سم من نهاية الجل. عندما يبرد الجل (10-20 دقيقة) ، تمت إزالة المشط ، ورفع الجل من صينية الصب ، ووضعه في صندوق الهلام مع الآبار القريبة من الكاثود ، وغمره (حتى 1 سم فوق الهلام) في المخزن المؤقت. تمت إضافة عينات الحمض النووي (10 ميكرولتر) مثل سلم lambda HindIII القياسي (Fisher Scientific ∼ دولار واحد لكل ممر) أو المستخلص الجيني بنسبة 1: 1 في صبغة التحميل (قطرة واحدة من شراب الذرة مع ثلاث قطرات من تلوين الطعام الأخضر) باستخدام ممص. استمر الرحلان الكهربي لمدة 1 إلى 1.5 ساعة ، مع ملاحظة انتقال الأصباغ التتبع. تم غمر المواد الهلامية في حمام بنفسجي الجنطيانا (10،000 × تخفيف) لمدة 12 إلى 72 ساعة دون رجها في درجة حرارة الغرفة. تم تصور نطاقات الحمض النووي مع الإضاءة الخلفية وتصويرها لمزيد من التحليل.

النتائج النموذجية

تظهر نتيجة هلام نموذجي يفصل سلم lambda HindIII في الشكل 2. لاحظ أن العصابات المنفصلة مرئية بعد التلوين ، حيث يمثل كل منها جزءًا من DNA مختلف الحجم من السلم. نجح الطلاب في اختبار الفصل الدراسي لدينا في تصور عصابات الحمض النووي في المواد الهلامية. يميل الحمض النووي الجينومي إلى تكوين نطاقات منتشرة وذات وزن جزيئي مرتفع ، ولكن يمكن أيضًا أن ينتج أكثر من نطاق واحد. قد تكون هذه بأحجام مختلفة أو قد تكون مطابقة مختلفة (على سبيل المثال ملفوفة فائقة) للحمض النووي الجيني الذي يؤدي إلى تغييرات في التنقل الكهربي. سوف ينقل الكهربي لفترات أطول نطاقات الحمض النووي إلى داخل الهلام ويوفر فصلًا أفضل. يمكن الحصول على نطاق أوسع من أحجام النطاقات عن طريق قص الحمض النووي الجيني أولاً عن طريق المرور السريع المتكرر عبر إبرة حقنة أو باستخدام إنزيمات تقييد متاحة تجارياً.

الجدولة والتقييم

اعتمادًا على جداول الجرس ، قد يكون من الأفضل فصل الخطوات في البروتوكول إلى كتل مختلفة. في تجاربنا ، تم استخدام الكتلة الأولى لنشاط لممارسة سحب العينات والمناقشات حول الإجراء وأسبابه المنطقية. تم بناء علب الهلام وصب المواد الهلامية وتحميلها وتشغيلها في الكتلة الثانية (باستخدام سلم lambda HindIII). قام المعلم بإزالة المواد الهلامية من البقع فيما بعد وقام بتخزينها لكتلة ثالثة ، حيث تم توثيق أنماط الشريط وتحليلها. تم إعطاء الطلاب ورقة عمل لإكمالها أثناء انتظار إكمال الإجراءات التي تضمنت أسئلة حول أساس الرحلان الكهربائي ، والحمض النووي السالب الشحنة الذي يسمح بالفصل الكهربي ، وتحديد الأطوال الجزيئية من خلال تحليل أنماط النطاقات. تم استخدام الأسئلة المفتوحة والإجابات المتمحورة حول الطالب ووقت الانتظار المناسب والسلوكيات غير اللفظية للانخراط في الحوار واستخلاص الأفكار [15-18]. قام الطلاب بإنشاء تقرير معمل قياسي وتم تصنيفهم وفقًا لتفاعلاتهم المستمرة خلال الدروس. يمكن للمدرسين أيضًا تقييم فهم الطلاب من خلال المشاريع التوسعية (انظر أدناه).

استطلاعات الطلاب

كان فصل الاختبار في NEM من طلاب السنة الثانية بشكل أساسي في خمس مجموعات من 4-5 طلاب لكل منها. تم إكمال الاستطلاعات باستخدام مقياس من نوع ليكرت من قبل جميع الطلاب البالغ عددهم 21 طالبًا ، مع الحصول على إذن مناسب من الوالدين والمدرسة (الجدول 1). بشكل عام ، كانت الدرجات 4.0 أو أعلى ، مما يشير إلى أن الطلاب قدّروا النشاط ووجدوه ذا قيمة. كانت النتائج بشكل ملحوظ (ص & lt 0.05) أعلى من المتوقع لكل سؤال (باستثناء س 13) باستخدام تحليل مربع كاي وتوقع توزيع متساوٍ عبر الإجابات. رأى الطلاب أن النشاط متصل بمقرراتهم الدراسية ومحدّث. شعر الطلاب أنهم شاركوا بنشاط وتعلموا شيئًا ذا قيمة وأرادوا إجراء المزيد من التحقيقات العلمية. اتفقت أعلى الدرجات على أن النشاط كان ممتعًا ومنظمًا جيدًا. لم يشعر الطلاب بخيبة أمل لأن النشاط استخدم مواد منخفضة التكلفة بدلاً من معدات المختبرات. على الرغم من أن متوسط ​​الردود كان إيجابيًا ، إلا أن اثنين من الطلاب حصلوا على درجات أقل بشكل عام ، حيث انخفضوا إلى ما دون المستوى المحايد (3.0). مجتمعة ، كانت نتائج الاستطلاع هذه أعلى بكثير (ص & lt 0.01) مما كان متوقعًا ويشير إلى أن الطلاب اعتبروا نشاط الفصل الكهربائي ناجحًا وإضافة قيمة إلى دورة تمهيدية في علم الأحياء في المدرسة الثانوية. أظهرت استطلاعات المحتوى التي أجريت سابقًا بعد أنشطة كهربية مماثلة باستخدام معدات المختبرات في NEM والمدارس الثانوية الأخرى التابعة لـ WPS زيادة ملحوظة في معرفة المحتوى الخاصة بالنشاط [11]. وتجدر الإشارة إلى أنه لا يُتوقع أن يؤدي نشاط الفصل الدراسي الواحد ، في حد ذاته ، إلى زيادة ملحوظة في الأداء في التقييمات العلمية واسعة النطاق أو الدرجات الكلية للدورة التدريبية.

سؤال النتيجة ± SDa مقياس من نوع ليكرت: 1 = لا أوافق بشدة 2 = لا أوافق 3 = لا أوافق ولا أعارض 4 = موافق 5 = أوافق بشدة.
1. تم تنظيم جلسات مختبر الجل بشكل جيد 4.3 ± 0.8
2. تم شرح الخطوات التجريبية بشكل جيد 4.2 ± 0.8
3. حفز مختبر هلام المشاركة النشطة 4.1 ± 0.9
4. كنت متحمسا لرؤية النتائج 4.1 ± 0.9
5. نجحت التجربة بشكل جيد لمجموعتي 4.1 ± 0.9
6. لم أكن سعيدًا لأننا استخدمنا مواد منخفضة التكلفة 2.1 ± 1.0
7. جعلني مختبر الهلام أفكر بشكل خلاق 3.7 ± 0.8
8. شعرت وكأنني أقوم ببحث حقيقي 3.5 ± 1.0
9. استخدام معدات معملية جديدة يثير اهتمامي بالعلوم 4.0 ± 0.9
10. احتوى مختبر الجل على أحدث المعلومات 4.0 ± 0.9
11. أستاذي يمكن أن يجيب على أسئلتي 4.1 ± 1.1
12. ساعدني مختبر الهلام على فهم المفاهيم المهمة 3.9 ± 0.9
13. فهمي للحمض النووي أفضل بعد مختبر الهلام 3.7 ± 1.1
14. تعلمت كيفية استخدام مكبرات الصوت 4.0 ± 1.2
15. أشعر أنني تعلمت شيئًا من هذا النشاط 4.1 ± 0.8
16. كان مختبر الجل مناسبًا لفصلي 4.2 ± 0.8
17. كان معمل الهلام أداة تعليمية قيمة 3.9 ± 1.0
18. جعلني النشاط أرغب في إجراء المزيد من التجارب 3.9 ± 1.0
19. كان معمل الجل عالي الجودة 4.0 ± 0.8
20. كان من الممتع القيام بمختبر الهلام 4.3 ± 0.8
  • مقياس من نوع ليكرت: 1 = أعترض بشدة 2 = لا أوافق 3 = لا أوافق ولا أعارض 4 = أوافق 5 = أوافق بشدة.

الاغاروز والأكريلاميد الهلام

يمنع الأكسجين بلمرة الأكريلاميد. لذلك يجب سكب هذه المواد الهلامية عموديًا بين لوحين زجاجيين يفصل بينهما فاصلان بلاستيكيان. هذه العملية تستغرق وقتًا طويلاً وتتطلب أكثر من الناحية الفنية من الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز الأفقي. ومع ذلك ، فإن المواد الهلامية من مادة الأكريلاميد تتمتع بقدرة حل ممتازة. يتم استخدامها عند الحاجة إلى درجة عالية من الفصل (أي اختلاف حجم زوج أساسي واحد) ، كما هو الحال عند تسلسل الحمض النووي.

مخازن الرحلان الكهربائي

عينات الحمض النووي

كشف

يمكن تلطيخ المواد الهلامية إما قبل أو بعد تشغيل الرحلان الكهربائي. لتلوين مادة هلامية قبل تشغيل الرحلان الكهربائي ، يضاف بروميد إيثيديوم إلى الاغاروز المذاب قبل سكبه في علبة الهلام. طريقة التلوين هذه هي الأسرع وتوفر ميزة أنه يمكن مراقبة موضع الحمض النووي أثناء الفصل. بشكل بديل ، يمكن وضع الجل في محلول مخفف من بروميد إيثيديوم لمدة 10-30 دقيقة بعد تشغيل الرحلان الكهربائي.

العوامل المؤثرة على الحركة


ما هو الرحلان الكهربائي للهلام النبضي؟

الرحلان الكهربائي للجل النبضي ، أو PFGE ، هو تقنية تستخدم لفصل جزيئات الحمض النووي الكبيرة جدًا.

في ظل ظروف الرحلان الكهربائي القياسية ، يتم تطبيق مجال كهربائي في اتجاه واحد على هلام الاغاروز ، وتتحرك جزيئات الحمض النووي التي يزيد حجمها عن 40 كيلو قاعدة معًا بشكل أساسي عبر الهلام ، بغض النظر عن حجمها.

في المقابل ، يطبق PFGE مجالًا كهربائيًا يغير الاتجاه بشكل دوري. من خلال إدخال تدرج جهد متناوب على نظام PFGE ، يمكن فصل أجزاء كبيرة جدًا من الحمض النووي عن طريق إعادة توجيهها وحركتها بسرعات مختلفة عبر الهلام. تكون القطع الأكبر من الحمض النووي أبطأ لمحاذاة شحنتها مع التغيير في الاتجاه ، بينما تكون القطع الأصغر أسرع في المحاذاة ، مما يؤدي إلى انفصال أكبر.

معدات PFGE الناجحة وظروف أمبير

دع & rsquos نلقي نظرة فاحصة على المعدات والظروف التي ستؤدي إلى نجاح PFGE.

هنا غرفة التفريد ، والتي تحتوي على عازلة التشغيل. يجب أن يكون هلام الاغاروز مثبتًا جيدًا في منتصف هذه الغرفة حتى لا يطفو. توجد أزواج متعددة من الأقطاب الكهربائية حول الجل ، موضوعة في شبكة سداسية. يسمح هذا الشكل السداسي للأقطاب الكهربائية بالتبديل الاتجاهي للجهد. يتم تبديل الجهد بشكل دوري بين ثلاثة اتجاهات: واحد يمر عبر المحور المركزي للهلام ، واثنان يعملان بزاوية 60 درجة على كلا الجانبين.

تستغرق تقنية PFGE وقتًا أطول من الرحلان الكهربائي للهلام القياسي ، نظرًا لحجم شظايا الحمض النووي ، ولأن الأجزاء لا تتحرك في خط مستقيم.

لمنع ارتفاع درجة حرارة هلام الاغاروز بسبب الفترة الممتدة تحت المجال الكهربائي ، مما قد يؤدي إلى فقدان الدقة ، تقوم وحدة التبريد بضبط درجة حرارة المخزن المؤقت. يتم تشغيل برنامج PFGE النموذجي عند 14 أو 15 درجة مئوية. من المهم عدم ترك أي هواء في الأنبوب من وإلى وحدة التبريد.

في وحدة التحكم ، يمكن إدخال بروتوكول الترحيل ومراقبته. يتضمن ذلك أوقات التبديل الأولية والنهائية ، ومدة الترحيل ، وزاوية الرحلان الكهربائي والجهد.

كلما كبرت شظايا الحمض النووي ، كلما طالت أوقات النبض ، وزمن إجمالي الهجرة أطول. وقت التبديل هو طول الوقت الذي ينبض فيه المجال الكهربائي في اتجاه واحد. على سبيل المثال ، يعني وقت التبديل لمدة 10 ثوانٍ أن المجال الكهربائي سوف ينبض في اتجاه واحد لمدة 10 ثوانٍ ثم يتحول إلى اتجاه آخر لمدة 10 ثوانٍ.

يمكن حل العينات التي تحتوي على مجموعة كبيرة من أحجام أجزاء الحمض النووي ، مثل NEB & rsquos PFG Markers ، عن طريق زيادة وقت التبديل من وقت قصير إلى وقت أطول ، على مدار فترة التشغيل.

تم تحسين معظم بروتوكولات PFGE لتشغيل هلام 6 فولت لكل سنتيمتر وتم تحسينها لزاوية 120 درجة. باستخدام أي نظام PFGE ، اعتمادًا على بروتوكول الترحيل ، يمكنك فصل أجزاء أو جزيئات الحمض النووي من 10 كيلو قاعدة إلى 10 ميجا بايت.

فيما يلي أمثلة لفصل مزيج Lambda Mono Cut Mix ، من 1.5 إلى 48.5 كيلو قاعدة ، وكروموسومات الخميرة ، من 225 إلى 1900 كيلو قاعدة.


ما هو الرحلان الكهربائي للهلام النبضي؟

الرحلان الكهربائي للجل النبضي ، أو PFGE ، هو تقنية تستخدم لفصل جزيئات الحمض النووي الكبيرة جدًا.

في ظل ظروف الرحلان الكهربائي القياسية ، يتم تطبيق مجال كهربائي في اتجاه واحد على هلام الاغاروز ، وتتحرك جزيئات الحمض النووي التي يزيد حجمها عن 40 كيلو قاعدة معًا بشكل أساسي عبر الهلام ، بغض النظر عن حجمها.

في المقابل ، تطبق PFGE مجالًا كهربائيًا يغير الاتجاه بشكل دوري. من خلال إدخال تدرج جهد متناوب على نظام PFGE ، يمكن فصل أجزاء كبيرة جدًا من الحمض النووي عن طريق إعادة توجيهها وحركتها بسرعات مختلفة عبر الهلام. تكون القطع الأكبر من الحمض النووي أبطأ لمحاذاة شحنتها مع التغيير في الاتجاه ، بينما تكون القطع الأصغر أسرع في المحاذاة ، مما يؤدي إلى انفصال أكبر.

معدات PFGE الناجحة وظروف أمبير

دع & rsquos نلقي نظرة فاحصة على المعدات والظروف التي ستؤدي إلى نجاح PFGE.

هنا غرفة التفريد ، والتي تحتوي على عازلة التشغيل. يجب أن يكون هلام الاغاروز مثبتًا جيدًا في منتصف هذه الغرفة حتى لا يطفو. توجد أزواج متعددة من الأقطاب الكهربائية حول الجل ، موضوعة في شبكة سداسية. يسمح هذا الشكل السداسي للأقطاب الكهربائية بالتبديل الاتجاهي للجهد. يتم تبديل الجهد بشكل دوري بين ثلاثة اتجاهات: واحد يمر عبر المحور المركزي للهلام ، واثنان يعملان بزاوية 60 درجة على كلا الجانبين.

تستغرق تقنية PFGE وقتًا أطول من الرحلان الكهربائي للهلام القياسي ، نظرًا لحجم شظايا الحمض النووي ، ولأن الأجزاء لا تتحرك في خط مستقيم.

لمنع ارتفاع درجة حرارة هلام الاغاروز بسبب الفترة الممتدة تحت المجال الكهربائي ، مما قد يؤدي إلى فقدان الدقة ، تقوم وحدة التبريد بضبط درجة حرارة المخزن المؤقت. يتم تشغيل برنامج PFGE النموذجي عند 14 أو 15 درجة مئوية. من المهم عدم ترك أي هواء في الأنبوب من وإلى وحدة التبريد.

في وحدة التحكم ، يمكن إدخال بروتوكول الترحيل ومراقبته. يتضمن ذلك أوقات التبديل الأولية والنهائية ، ومدة الترحيل ، وزاوية الرحلان الكهربائي والجهد.

كلما كبرت شظايا الحمض النووي ، كلما طالت أوقات النبض ، وزمن إجمالي وقت الترحيل. وقت التبديل هو طول الوقت الذي ينبض فيه المجال الكهربائي في اتجاه واحد. على سبيل المثال ، يعني وقت التبديل لمدة 10 ثوانٍ أن المجال الكهربائي سوف ينبض في اتجاه واحد لمدة 10 ثوانٍ ثم يتحول إلى اتجاه آخر لمدة 10 ثوانٍ.

يمكن حل العينات التي تحتوي على مجموعة كبيرة من أحجام أجزاء الحمض النووي ، مثل NEB & rsquos PFG Markers ، عن طريق زيادة وقت التبديل من وقت قصير إلى وقت أطول ، على مدار فترة التشغيل.

تم تحسين معظم بروتوكولات PFGE لتشغيل هلام 6 فولت لكل سنتيمتر وتم تحسينها لزاوية 120 درجة. مع أي نظام PFGE ، اعتمادًا على بروتوكول الترحيل ، يمكنك فصل أجزاء أو جزيئات الحمض النووي من 10 كيلو قاعدة إلى 10 ميجا بايت.

فيما يلي أمثلة لفصل مزيج Lambda Mono Cut Mix ، من 1.5 إلى 48.5 كيلو قاعدة ، وكروموسومات الخميرة ، من 225 إلى 1900 كيلو قاعدة.


مراجع

[1] جونز ، ت. مجلة IEEE Engineering in Medicine and Biology 2003، 22 (6) ، 33-42. http://dx.doi.org/10.1109/memb.2003.1304999.

[2] Qian، C. Huang، H. Chen، L. Li، X. Ge، Z. Chen، T. Yang، Z. Sun، L. المجلة الدولية للعلوم الجزيئية 2014، 15 (12) ، 18281-18309. http://dx.doi.org/10.3390/ijms151018281

[3] هيوز ، م. الموائع الحيوية 2016، 10 (3)، 032801. http://dx.doi.org/10.1063/1.4954841

[6] فولدمان ، ج. المراجعة السنوية للهندسة الطبية الحيوية 2006، 8 (1) ، 425-454. دوي: http://dx.doi.org/10.1146/annurev.bioeng.8.061505.095739

[7] بيثيج ، ر. مجلة الجمعية الكهروكيميائية 2016، 164 (5). دوي: http://dx.doi.org/10.1149/2.0071705jes

[8] هسو ، T.-R. النظم الكهروميكانيكية الصغرى والأنظمة الدقيقة: التصميم والتصنيع وهندسة النانو جون وايلي: هوبوكين ، نيوجيرسي ، 2008.


هل ينبغي أن يتناسب طول الأقطاب الكهربائية في حجرة الرحلان الكهربائي مع حجم الغرفة؟ - مادة الاحياء

بروتوكول لتحليل SDS-PAGE

أرون مالك وهارنيش وبريانكا شوبرا وستانزين أنغمو وهاريوم ياداف [*]

المعهد الوطني للتكنولوجيا الحيوية في الأغذية الزراعية ، موهالي ، البنجاب ، الهند

تستخدم تقنية SDS-PAGE على نطاق واسع في البيولوجيا الجزيئية ، وتستخدم لفصل البروتينات وفقًا لطولها في سلسلة البولي ببتيد الخطية. لا يمكن استخدام تقنية الفصل الكهربائي العامة لقياس الوزن الجزيئي للجزيئات البيولوجية ولكن هذه التقنية تستخدم في الغالب لقياس الكتلة الجزيئية. يعني مصطلح الرحلان الكهربائي حركة الجسيمات المشحونة إلى مجال كهربائي. في حركة المجال الكهربائي للبروتينات نحو القطب الكهربائي ذي الشحنة المعاكسة. يتم فصل البروتينات حسب شكلها وحجمها.

تم إجراء SDS-PAGE على صب المواد الهلامية لتجنب المتاعب وخطر العمل مع مادة الأكريل أميد. في هذا البروتوكول وجود SDS وبيتا مركابتويثانول الذي يستخدم لتفسد البروتينات في وحداتها الفرعية.

شكل. تدفق عملية SDS-PAGE

حلول المخزون: حل محلول 12٪ جل

  1. 30٪ أكريلاميد / مكرر (37.5: 1)
    خذ 29.2 جم أكريلاميد + 0.8 جم N ، N - مكرر ميثيلين - أكريلاميد. أضف إلى 100 مل من الماء.
  2. 1.5 م تريس- HCL ، درجة الحموضة 6.8
    خذ 6 جم قاعدة تريزما. ضبط الأس الهيدروجيني 8.8 مع 6 N HCL. أضف إلى 60 مل ماء إليها.
  3. 10٪ (وزن / حجم) SDS
    لعمل 100 مل SDS ، خذ 10 جم من SDS و 90 مل من الماء يضاف إليها.
  4. ماء مقطر 3.35 مل.
  5. TEMED 5 ميكرولتر.
  6. 10٪ APS (أمونيوم بيرسلفات) 50 ميكرولتر.

  1. تشتمل الحفارات PAGE على فواصل وأمشاط وألواح زجاجية (10 × 20 سم).
  2. عينة البروتين.
  3. عينة عازلة تحتوي على SDS وإما السكروز أو الجلسرين.
  4. 2-ميركابتويثانول.
  5. 1 X تشغيل العازلة

25 ملم تريس- HCL
200 ملي جليكاين
0.1٪ (وزن / حجم) SDS
الحجم التقريبي من الماء يحفظ أقل من لتر واحد ويعتمد على نظام الرحلان الكهربي.

10٪ (وزن / حجم) SDS
10 ملي ديثيوثريتول أو بيتاميركابتو إيثانول
20٪ (ت / ت) الجلسرين
0.2 م تريس- HCL ، فتاه 6.8
0.05٪ (وزن / حجم) بروموفينول بلو

صب الجل في كاسيت البروتين المصغر

  1. تحضير هلام حل ، وإضافة جميع الكواشف لصنع هلام باستثناء TEMED وبسلفات الأمونيوم (APS). بمجرد إضافة TEMED و APS ، يتم بلمرة المحلول في غضون دقائق قليلة.
  2. ضع إطارات الزجاج المصبوب على حبلا الصب. صب الجل المحلول بين الإطارات الزجاجية.
  3. بعد صب الجل ، أدخل المشط برفق وقبل أن يتبلمر الجل.
  4. اترك البلمرة حتى يتماسك الجل لمدة 25-30 دقيقة.

الكهربائي

  1. خذ الإطارات الزجاجية من حبلا الصب واحتفظ بها في غرفة الرحلان الكهربائي.
  2. ملء الغرفة مع المخزن المؤقت وتحميل عينات البروتين في آبار هلام ثم إغلاق غرفة التفريد.
  3. قم بتوصيل الأسلاك الكهربائية الحمراء والسوداء بالأقطاب الكهربائية الملونة المطابقة لتجميع القطب.
  4. ضع الجهد على حوالي 120 فولت ويمكننا استخدام هلام فصل 12٪. قم بتشغيل الجل عادة حوالي 40-50 دقيقة حتى تنتقل صبغة البروموفينول إلى قاع الجل.
  5. بعد ترحيل صبغ الجزء السفلي من هلام إزالة التجمع القطب.

تحليل البروتين والكشف عنه

تصور البروتين باستخدام Coomassie Brilliant Blue ، وصبغة الفضة ، أو يمكننا استخدام أي بقعة بروتين أخرى.


كيف يعمل؟

هناك عدة أنواع من تقنيات PAGE المستخدمة ، ولكن الأكثر شيوعًا هو SDS-PAGE. في SDS-PAGE ، يتم استخدام المنظف كبريتات دوديسيل الصوديوم لإفساد البروتينات وتطبيع نسبة الكتلة إلى الشحن. بدون SDS ، سيؤثر كل من الوزن الجزيئي وشحنة البروتين على فصله في الهلام. مع SDS ، يؤثر الوزن الجزيئي فقط على سرعة الترحيل وبالتالي يتم فصل العينات وفقًا لذلك. يُطلق على PAGE بدون SDS اسم PAGE الأصلي ، حيث تظل البروتينات في شكلها الأصلي.

جل ماتريكس

كما هو الحال مع الاغاروز الكهربائي للهلام ، يتم فصل العينات باستخدام مجال كهربائي ، وتمر عبر مصفوفة هلامية تؤثر على هجرة البروتينات. في PAGE ، بدلاً من الاغاروز ، نستخدم مادة كيميائية تسمى بولي أكريلاميد. يتيح لنا تغيير نسبة البولي أكريلاميد في الجل تغيير حجم المسام في الجل ، مما يعني أنه يمكننا فصل أحجام مختلفة من البروتين بنسب مختلفة من الهلام. النسب المئوية للجيل النموذجية موضحة في الجدول أدناه.

نسبة مادة الأكريلاميدقرار الفصل
5 %60 - 220 ك
7.5 %30 - 120 دينار كويتي
10 %20 - 75 دينار كويتي
12%17 - 65 د
15 %15-45 د
17.5%12 - 30 د

يباع الأكريلاميد عادة في صورة سائلة ، حيث أن شكل المسحوق سام للأعصاب وخطير في التعامل معه. يتم تحقيق البلمرة عن طريق خلط مادة الأكريلاميد مع ثنائي أكريلاميد ، مما يسمح بتكوين روابط متقاطعة بين جزيئات الأكريلاميد. يتم إضافة مواد كيميائية إضافية لبدء البلمرة ، وعادة ما تكون بيرسلفات الأمونيوم كمصدر للجذور الحرة و TEMED كمثبت. بمجرد أن تبدأ البلمرة ، يُسكب الجل بين لوحين زجاجيين ويُترك للبلمرة تمامًا.

لا يتكون خليط الهلام في الماء ولكن في محلول الرحلان الكهربائي (Tris-HCl) ، الذي يوفر الأيونات للرحلان الكهربي. في كثير من الأحيان ، يتم سكب الجل في جزأين. الأجزاء الأولى عبارة عن مادة هلامية مُحللة ، برقم هيدروجيني حوالي 8.8 مما يؤدي إلى إبطاء هجرة البروتينات. فوق الجل المحلول ، يُسكب جل التكديس بدرجة حموضة 6.8 وحجم مسام أكبر. يعمل جل التكديس هذا على ضغط عينات البروتين في جبهة هجرة رقيقة ، بحيث تصل جميع البروتينات في العينة إلى هلام الحل في نفس الوقت ، مما يؤدي إلى هجرة نسبية دقيقة.

تشغيل الجل

على عكس الرحلان الكهربي لهلام الاغاروز ، حيث يتم صب المواد الهلامية في صواني يتم تشغيلها أفقيًا ، يتم صب المواد الهلامية SDS-PAGE عموديًا باستخدام جهاز الصب. نقوم بصب المواد الهلامية بهذه الطريقة بحيث تشكل المواد الهلامية المكدسة والمحلولة مادة هلامية مستمرة ، والتي ستكون أكثر صعوبة في الهلام الأفقي. كما أنه يسمح بتحميل كمية بروتين أكبر بكثير على الجل. يتم تقسيم خزان الجل أيضًا إلى قسمين. اعتمادًا على الشركة المصنعة ، سيكون للخزان غرفة عازلة داخلية (أو علوية) ، وغرفة عازلة خارجية (أو سفلية). هاتان الغرفتان متصلتان بالهلام لتكوين دائرة مستمرة. تحتوي كل غرفة وقطب كهربائي ، سلبي في الغرفة الداخلية وموجب في الغرفة الخارجية. تلامس الغرفة الداخلية الجزء العلوي من الهلام ، وعندما يتم تطبيق مجال كهربائي ، فإن البروتينات ستتجه نحو القطب الموجب في الغرفة العازلة الخارجية ، بسبب الشحنات السالبة لجزيئات SDS. المخازن المؤقتة النموذجية لـ SDS-PAGE هي Tris-Glycine للغرف العازلة ، و Tris-HCl للجيل.

يتم بعد ذلك تحديد سرعة الحركة عبر الهلام من خلال تدرج الجهد ، أي الجهد بين الأقطاب الكهربائية. The required field strength is related to the size of the gel tank being used and the required voltage can be calculated using the simple equation E = V/d where E is the field strength, V the voltage and d the distance in cm between electrodes. Vertical gel tanks are generally run at 5 – 10 V / cm so if your tank has an electrode distance of 10 cm, you would run the gel at 50 – 100V. The exact value depends on your samples and should be determined empirically.

To apply this electrical field, we use a DC power supply. Most electrophoresis power supplies can be set to provide either a constant current or a constant voltage, with each having advantages and disadvantages. One potential issue is the production of heat due to the flow of current through the system which can be especially high with larger tanks that require higher voltage. For this reason, it is advisable to use some form of cooling, either passive in the form of a cooling block, or active such as a recirculating chiller, for larger electrophoresis systems.

Visualising the Protein

After migration, proteins must be visualised to determine their length and abundance. There are several methods commonly used to visualise proteins that are either specific or non specific. Non specific protein visualisation targets all proteins, using dyes that bind to common regions of the proteins such as the amino groups. Examples of non-specific protein stains include Coomassie Brilliant Blue and Ruby Pro. These stains are often non-reversible and can (but don’t always) interfere with downstream applications. Non-specific staining can be useful for quickly quantifying samples in a gel, or for ensuring a sample of interest is present.

To specifically visualise certain proteins, we need to use antibodies. Antibodies recognise unique 3 dimensional structures in the protein to distinguish them from others. By conjugating the antibody with a dye or enzyme, we can visualise just the protein that it recognises. The process of moving proteins from a gel to a membrane that can be probed with antibodies is called western blotting. To Learn more about western blotting, you can read our dedicated article soon. Whether you are western blotting or just non-specific staining, you will need to visualise the proteins using the gel documentation system. The type of system you use will vary based on whether you are using a visible stain like coomassie, or fluorescent or chemiluminescent dye attached to an antibody. As with agarose gel documentation systems, gel documentation systems for proteins can come in a variety of specifications depending on the requirements. For more advice on gel docs you can read our dedicated article.


Electrophoresis Lab

In this lab we explored DNA replication and electrophoresis. Through use of various DNA samples running through an Agarose gel with a lab controlled electric current, we aimed to view the effects of electrophoresis. Although most of our results were inconclusive, we were able to identify one band representing electrophoresis.

Electrophoresis is a process in which DNA, which is negatively charged, is placed in a gel where an electric current is applied. The DNA particles move towards the positive charge at different rates based on the size of the DNA fragments. (Wootton). In this lab, strands of lambda of unknown lengths were run through the gel. DNA fragments of shorter lengths are able to travel a longer distance. The length of each DNA fragment was determined based off of the distance travelled from the origin.

The lab was conducted at New Tech High at Coppell on January 27 and 28, 2016 in the AP Biology classroom. It was conducted in 3 parts: Part A, Part B, and Part C.

Part A, Casting the Agarose Gel:

  1. Seal the ends of the gel-casting tray with tape, insert the comb, and set it aside.
  2. Pour the solution to cover 5-6 mm, and make sure that it does not cover the comb. Before the gel sets, move any bubbles or debris aside with a pipette. Allow the gel to solidify, and do NOT move the gel or tray for the 15-20 minutes it takes.
  3. Unseal the tray and place in the gel box so that the comb is at the negative end. This is the black/cathode end. Fill the box with TAE buffer to cover the entire surface.
  4. Gently remove the comb, and clear any dimples with buffer.

Part B, Loading the Gel:

  1. Load the contents of the first tube into the pipet, and steady it in your hand.
  2. Expel any air in the tip before loading the DNA sample, then expel it slowly into the buffer, underneath the surface.
  3. Complete the steps above for each sample

Part C, Electrophorese:

  1. Close the chamber and connect it to a power supply, ensuring that both electrodes are connected to the same supply.
  2. Turn on the power supply. You should see the loading dye moving toward the positive pole.
  3. The DNA should electrophorese until the blue band is about 1 cm from the end of the gel.
  4. Turn off power supply, remove the leads, and remove the lid of the chamber.
  5. Measure the distance the blue stain moved down the gel.

HindIII ايكو ارى
Distance Travelled (cm) Actual Bp Distance Travelled (cm) Actual Bp
*27,491
1.9 *23,130 1.9 10,400
2.1 9,416 2.3 7,240
2.4 6,557 2.5 6,190
2.9 4,361 2.8 4,900
3.6 2,322 3.2 3,350
3.8 2,027 3.6 2,375
**564 3,350
**125

  1. Discussion: Answers to questions 1 – 9 -Sameen
  1. The points were excluded because they are outliers based on the standard curve. This tells us that some of the gels are different sizes and have different sensitivities, making them imperfect, and therefore subject to inconsistencies.
  2. You would use the 0.3% gel.
  3. You would use the 2-2.5% gels.
  4. You would have to make sure the voltage would be less than 100 volts so it would take longer for the gel to run.
  5. Either the charges were switched or the gel was simply flipped.
  6. It would most likely be the 1080 and the 1000 bps that make up the doublet as they are the closest to each other.
  7. The restriction enzyme looks for the specific sequence to splice the DNA.
  8. .
  9. Because the restriction enzymes look for specific sequences and splice the DNA at particular places, we can use the enzymes to identify the DNA by the segments they were spliced at.
  1. Conclusion: Summarize what your group learned: what is electrophoresis, why does it work, what is an RFLP, restriction enzyme, ligase, etc. -Rahi

Throughout this lab, we learned what electrophoresis is, and the methods to prove that it works. Electrophoresis is used to separate macromolecules like DNA or RNA by size, or proteins by their charge. We use RFLP, restriction fragment length polymorphism, analysis which is a method in which a DNA sample is broken down into smaller pieces by restriction enzymes. These resulting fragments are separated by their lengths in a process called gel electrophoresis. This experiment also helped us understand that ligase, a glue-like protein, repairs the two smaller enzymes back into one larger structure. For our group, the end results were good for the Lambda DNA, but all of the other DNAs were non-visible. Even though this happened, we got to understand how gel electrophoresis works, and how restriction enzymes take part in DNA production.


شاهد الفيديو: bio elektroforese (كانون الثاني 2022).